摘 要：选取 12 个不同品种（系）马铃薯为材料，探索和建立较完备的马铃薯可溶性蛋白质分析技术体系。采用考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白含量和聚丙烯酰胺凝胶电泳分别进行水溶蛋白、盐溶蛋白和醇溶蛋白分析。结果表明：马铃薯不同品种间可溶性蛋白含量有较大差异；同一品种内几种可溶性蛋白也存在差异；电泳分析显示不同品种马铃薯水溶蛋白、盐溶蛋白和醇溶蛋白表现出一定的多态性。

马铃薯（Solanum tuberosum L.）作为第四大粮食作物，在世界范围内广泛种植，总面积达 3 亿亩，它在解决粮食安全、营养不良、贫困和环境威胁等各地聚焦问题上具有重要的地位。目前 ，关于马铃薯蛋白质的研究多集中在营养状况和品质分析等方面。在品种资源鉴定中，国内外学者分别从形态学、细胞学、生化和分子标记等方向做了部分研究。蛋白质作为基因表达的产物，能一定程度表现出品种资源的遗传多样性， 国外研究者曾报道了蛋白含量测定在马铃薯快速选种中的应用，但利用马铃薯蛋白质进行标记的品种资源鉴定手段至今未有系统的研究， 尤其是对马铃薯盐溶蛋白和醇溶蛋白的电泳分析鲜见报道。 马铃薯中蛋白质的种类以及蛋白质的组成与马铃薯品种密切相关， 同时也是食用马铃薯营养品质的重要组成成分。 本实验则通过对马铃薯块茎可溶性蛋白含量测定以及对水溶蛋白、盐溶蛋白和醇溶蛋白的电泳分析，试图探索和建立较完备的马铃薯可溶性蛋白质分析技术体系， 以期在蛋白水平为马铃薯的品种选育和种质资源鉴定提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试材料

N6-24（自选品系 ）、N6-47（自选品系 ）、N6-45（自选品系）、川芋 4 号、川芋 5 号、川芋 10 号、川芋39 号、川芋 56 号、中薯 2 号、渝薯 1 号、米拉和川引2 号，共 12 个品种（系）的原种。

1.1.2 主要试剂

考马斯亮蓝 G250、考马斯亮蓝 R250，丙烯酰胺、N，N，-甲叉双丙烯酰胺、十二烷基硫酸钠、三羟甲基氨基甲烷、甘氨酸，磷酸、氯化钠、2-氯乙醇等。

1.1.3 主要仪器

BS210S 电子分析天平，DYCZ-28A 型电泳槽，DYY-6B 型稳压稳流电泳仪，V-1100 型分光光度计，台式高速离心机等。

1.2 方法

1.2.1 马铃薯可溶性蛋白含量测定

将马铃薯新鲜块茎薯肉在 50℃烘干至恒重，研磨，过 80 目筛，获马铃薯干粉备用。水溶蛋白含量测定： 称取 100mg 马铃薯干粉，加 1mL H2O 室温间歇振荡浸提 2h，10000r/min 离心10min 取上清液，沉淀再加 1mL H2O 振荡浸提 30min，10000r/min 离心 10min， 重复 3 次以可溶蛋白浸提充分，合并上清液定容至 10mL。采用考马斯亮蓝 G-250 法测定蛋白含量。

盐溶蛋白含量测定：借用刘勇等方法并略有改进。称取 100mg 马铃薯干粉，加 1mL 2% NaCl 溶液室温间歇振荡浸提 2h，10000r/min 离心 10min 取上清液，沉淀加 1mL H2O 振荡浸提 30min，10000r/min离心 10min，重复 3 次，合并上清液定容至 10mL。测定方法同上。

醇溶蛋白含量测定： 称取 100mg 马铃薯干粉，加入 1mL 25% 2-氯乙醇室温提取 8h，10000r/min离心 10min 取上清液。测定时直接取母液 200μL测定，测定方法同上。

1.2.2 水溶蛋白质电泳

称取 50mg 马铃薯干粉， 加 0.5mL H2O 室温提取 2h，10000r/min 离 心 10min。 采 用 SDS-PAGE电泳，分离胶为 12.5%，浓缩胶为 3%，电极缓冲液为 pH 8.3 Tris-Gly 溶液（含 SDS），室温 150V 电泳2h。考马斯亮蓝染色，拍照绘图。

1.2.3 盐溶蛋白质电泳

称取 50mg 马铃薯干粉， 加 0.5mL 2% NaCl 溶液室温提取 2h，10000r/min 离心 10min。电泳方法同上。

1.2.4 醇溶蛋白质电泳

称取 50mg 马铃薯干粉，加 0.5mL 25% 2-氯乙醇室温提取 8h，10000r/min 离心 10min。 采用 ISTA于 1986 年颁布的 A-PAGE（pH 3.1）标准程序电泳分析醇溶蛋白。其中，凝胶浓度为 10%,室温稳压500V 电泳 20-30min。

2 结果与分析

2.1 可溶性蛋白质含量

水溶蛋白含量为 19.45-32.64mg/g，盐溶蛋白含量为 12.30-26.46mg/g，醇溶蛋白含量为 0.72-1.81mg/g。结果表明：不同品种马铃薯的可溶性蛋白含量存在较大差异； 同一品种内基本表现为以水溶蛋白为主，盐溶蛋白次之，醇溶蛋白含量比较低。

2.2 水溶蛋白质电泳分析

根据电泳图谱（图 1）可将其分为三个主要区组，即 W1 区、W2 区、W3 区。 其中 W1 区差异较大，W2区差异较小，W3 区无差异。12 份材料共产生 9 条迁移率不同的蛋白谱带， 每个材料可分离出 4-7 条谱带，仅 3 条（33.3%）带为 12 个材料的共同带，分别位于 W1 区和 W3 区，6 条（66.7%）带为多态性带。

2.3 盐溶蛋白质电泳分析

通过电泳图谱可知，盐溶蛋白电泳分离效果较好，12 份材料共产生 10 条迁移率不同的盐溶蛋白条带，每个材料可分离出 4-9 条带，仅 3 条（30%）带为 12 个材料的共同带，7 条（70%）带为多态性带。也可将其分为三个区组，即 S1 区、S2 区、S3区，且各区存在共同谱带，其中 S1 区和 S3 区差异较大，S2 区差异较小。

2.4 醇溶蛋白质电泳分析

由电泳图谱易知，马铃薯醇溶蛋白主要分布在三个区域，即 A1 区、A2 区、A3 区，且各区域存在较大差异。12 份材料共产生 11 条迁移率不同的醇溶蛋白条带，且为多态性带，每个材料可分离出 1-7 条带。

3 讨论

马铃薯的蛋白品质高且含量丰富，大部分为可溶性蛋白质， 占总蛋白质含量的 71.6-74.5%，通过对马铃薯可溶蛋白含量的测定，可以详细地反映出马铃薯蛋白的分布状况，有助于马铃薯品种的选育和合理加工开发利用。

从实验结果来看，马铃薯水溶蛋白、盐溶蛋白和醇溶蛋白经聚丙烯酰胺凝胶电泳可获得清晰易辩的图谱，具有较好的多态性，呈现出品种特有的谱带组合。因此，可根据马铃薯蛋白电泳图谱的特征带型分析种质资源的特异性，为马铃薯种质资源鉴定提供依据。并且，蛋白质电泳分析在品种纯度和真实性检验、品种亲缘关系和系统分类及地理分布的研究、品种遗传多样性研究、新品种鉴定和植物抗性选育等方面具有广阔的应用前景。

来源：惠合不锈钢容器厂家