摘要：介绍了利用比色法测定橙汁饮料中柚皮苷的方法。柚皮苷与一缩二乙二醇反应显色，在 420 nm波长下测定其吸光度，建立柚皮苷含量与吸光度的线性方程为D（λ） =3.473 2 ρ+0.008 9，线性范围为 0 g / L~0.24 g/ L，r =0.998 9，平回收率为 97.49%，相对标准偏差为 2.85%。该方法具有简便、快速、准确的特点，适用于含有此类物质饮料的检测。

柚子是芸香科植物柚的成熟果实，是我国东南沿海地区出产的主要水果之一，栽培面积及产量居世界首位。柚子含有各类维生素及生物活性物质，是制作各种饮料的优良原料。柚子中含有丰富的生物类黄酮，柚皮苷是其主要成份，占其总黄酮质量的 80%。柚皮苷具有多种生理功能，具有抗氧化、抗菌、消炎以及抗病毒等作用。但是另一方面，柚皮苷又是许多饮料中苦味物质的主要来源，含量过 50 mg / L 时就会产生苦感。

因此，在此类饮料的生产加工的过程中，建立对柚皮苷的快速、简便、准确的测定方法是必要的。目前，对于柚皮苷的检测主要有高效液相法和分光光度法。高效液相法存在试剂用量大、过程复杂、检测时间长以及成本较高等缺点；分光光度法测定的是总黄酮的含量，与实际结果有一定的误差。比色法测定通过柚皮苷与特定的显色剂发生反应，能够较为准确和快速地测定出样品中柚皮苷的含量。本试验研究了利用比色法测定饮料中的柚皮苷的含量，为此类产品的监控提供了一个较为实用的方法。

1 材料与方法

1.1 实验材料

含柚汁饮料，购自宣城市苏果市；柚皮苷标准品，购自 Sigma 公司，纯度≥98 g /100g；其他试剂购自国药集团上海化学试剂公司，为分析纯。

1.2 仪器设备

723型可见光分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；TDL- 40B 台式离心机，上海安亭科学仪器厂；EL- 20 实验室 pH 计，梅特勒 – 托利多仪器（上海） 有限公司；BS224S 电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司。

1.3 溶液的制备

1.3.1 对照品溶液的制备

精密称取经过干燥后至恒重的柚皮苷对照品1 g 于 1000 mL 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制得质量浓度为 1 g / L的对照品溶液，使用时按比例稀释到所需的质量浓度。

1.3.2 供试品溶液的制备

将市面上购得的含柚汁饮料经过滤纸过滤后置于 500 mL容量瓶中即为供试品。

1.3.3 样品的测定

取供试品溶液 1.0 mL，注入 10 mL 的具塞比色管中，每个比色管中再加入体积浓度 90%的一缩二乙二醇 5 mL、4 mol / L的 NaOH 溶液 0.1 mL、蒸馏水 3.9 mL后混匀，于 40 ℃水浴加热 10 min 显色后于 420 nm处测吸光度值。

2 结果与讨论

2.1 吸收波长的确定

取对照品、供试品溶液各 1.0 mL，分别注入10 mL的具塞比色管中，每个比色管中再加入体积浓度90%的一缩二乙二醇 5 mL、4 mol / L 的 NaOH溶液 0.1 mL、蒸馏水 3.9 mL 后混匀，于 40 ℃水浴加热 10 min 显色后，利用分光光度计进行全波长扫描，结果表明，两者在 420 nm处有吸收。

2.2 显色条件的优化

在样品溶液加热显色的过程中，有许多因素对吸光度值都有影响。

本试验主要考察了显色温度、显色时间以及加碱量对于测定的影响。

2.2.1 显色温度的影响

以 1.0 mL的标准液为试样，分别在 30℃、35℃、40 ℃、45 ℃的条件下显色。结果表明随着温度的升高，显色达到平衡所需要的时间就相对越短，综合考虑以 40 ℃为显色温度。

2.2.2 显色时间的影响

以1.0 mL的标准液为试样，在 40 ℃条件下分别显色 4 min、6 min、8 min、10 min、12 min、14 min，

结果可见在 10 min 时就已经达到吸光度值，因此显色时间定为10 min。

2.2.3 加碱量的影响

用比色法测定柚皮苷的含量，是基于柚皮苷在碱性条件下与一缩二乙二醇反应呈黄色为基础的，所以加碱量对反应有重要的影响。以 1.0 mL的标准液为试样，添加了不同量的 4 mol/L 的 NaOH 溶液，考察其对吸光度值的影响，由试验结果可见碱的添加量在 0.1 mL比较合适。

2.3 线性关系

准确称取一定质量的柚皮苷标准品，分别配制成 0.04 g/ L、0.08 g / L、0.12 g / L、0.16 g / L、0.20g / L、0.24 g / L 的柚皮苷标准溶液，用移液管取以上不同质量浓度的柚皮苷标准液各 1.0 mL分别注入10 mL的具塞比色管中，每个比色管中再加入体积浓度90%的一缩二乙二醇 5 mL、4 mol / L 的 NaOH溶液0.1 mL、蒸馏水 3.9 mL 后混匀，于 40 ℃水浴加热 10 min，在 420 nm 下测吸光度，以 1.0 mL 蒸馏水做同样处理作空白对照，以吸光度值对标样的含量作图，其标准曲线方程为D（λ）=3.473 2 ρ+0.008 9线性范围为 0 g / L~0.24 g / L，r=0.998 9，线性关系良好。

2.4 稳定性试验

以 0.16 g/ L的标准溶液按照 1.3.3 所述的方法，分别于 0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h 进行显色反应测定吸光度值，其吸光度值分别为 0.567、0.566、 0.552、 0.549、 0.540、 0.538、 0.536， 其RSD为 2.33%，表明供测试的样品在 6 h 内基本保持稳定。

2.5 重复性试验

以 0.08 g / L 的标准溶液按上述 1.3.3 的方法重复显色反应 5 次，测吸光度值分别为 0.304、0.311、0.308、0.315、0.302，计算RSD为 1.70%，可见该方法的重复性较好。

2.6 回收率试验

准确量取已测柚皮苷含量的柚汁饮料 100 mL，加入一定质量的柚皮苷标准品，混合匀后，取1.0 mL，按照 1.3.3 项进行测定，计算加样回收率，结果平回收率为 97.49%，RSD 为 2.85%。

2.7 样品的检测

选取 5 个批号的样品，按照 1.3.2 项的方法制备，并且按照1.3.3 项操作测定这 5 份样品中中柚皮苷的含量，样品中柚皮苷的含量结果见表2，饮品中的柚皮苷的含量平为 1.406 mg / L，低于人的苦感值50 mg / L。

在不影响口感得前提下，果汁饮料中含有适量的柚皮苷有利于提高产品的生理保健功能。

来源：惠合不锈钢容器厂家